細胞實驗室建設

細胞實驗室建設簡要說明

組織細胞培養技術與其他一般實驗室工作的主要區別在于要求保持無菌操作,避免微生物及其他有害因素的影響。目前,超凈工作臺的廣泛使用,很大程度上方便了組織細胞培養工作,并使一些常規實驗室有可能用于進行細胞培養。

一、常規細胞培養室的設置和設施

1. 無菌操作室:

由更衣間,緩沖間和操作間三部分組成

⑴更衣間:位于培養室外部,用于更換潔凈的衣帽鞋口罩。放置消毒的防護服、衣帽柜、鞋柜。

⑵緩沖間:位于更衣間與操作間之間,目的是為了保證操作間的無菌環境。放置電冰箱、液氮灌、消毒好的無菌物品等。

⑶操作間:位于內部,專用于無菌操作、細胞培養。放置凈化工作臺及二氧化碳培養箱,離心機,倒置顯微鏡等。

房間要求:獨立房間,按潔凈廠房要求建造,并需要保持空氣消毒和清潔無塵:

紫外線燈—產生臭氧,并且室內溫度及濕度均較高,不利于工作人員健康。

空氣過濾的恒溫恒濕裝置—-,空氣潔凈度級別如下:

注:空氣潔凈度級別表:一般普通培養室常選用100000級的

2. 準備室:常設置在無菌操作室外部,主要進行培養液及有關培養用的液體等的制備。主要設置:離心機、水浴鍋、定時鐘表、普通天平及日常分析處理物

3. 洗刷消毒間:要和其他區域分開,獨立一室,主要用于各種培養器皿的清洗、準備和消毒,常設置:烘箱、高壓蒸汽消毒鍋、去離子水或者蒸餾水處理器、酸缸、水槽刷子等。

二.常用的基本設備

1. 儀器:

1). 超凈工作臺:操作簡單,安裝方便,占用空間小且凈化效果很好。一般細菌培養室使用的凈化工作臺主要有兩種:a)側流式或稱垂直式 b)外流式或稱水平層流式。

凈化工作臺工作原理(大致相同)—-通常是將室內空氣經粗過濾器初濾,由離心風機壓入靜壓箱,再經高效空氣過濾器精濾,由此送出的潔凈氣流以均勻的斷面風速通過無菌區,從而形成無塵無菌的高潔凈度工作環境。

側流式工作臺—-空氣凈化后的氣流由左或右側通過工作臺面流向對側,也有從上向下或從下向向對側,形成氣流屏障保持工作區無菌。工作臺結構為封閉式。

外流式(水平式)工作臺—-凈化后的空氣面向操作者流動,因而外方氣流不致混入操作,但進行有害物質實驗操作則對操作者不利。工作臺結構為開放式。

2). 顯微鏡:倒置熒光顯微鏡,若有條件,尚可配置帶有照相系統的高質量相差顯微鏡、解剖顯微鏡、錄像系統或縮時電影拍攝裝置等,以便隨時觀察、記錄、攝影細胞生長情況。

3). CO2培養箱:CO2培養箱的優點是能夠提供進行細胞培養時所需要的量的CO2(常用濃度為5%),易于使培養液的pH保持穩定,適用于開放或半開放培養。

4). 干燥箱:電熱干燥箱升溫較高,一般需達到160℃以上。

5). 水純化裝置:產生去離子水,可用三蒸水替代。

6). 冰箱:低溫冰箱(-20℃)、超低溫冰箱(-70,80C,)

7). 液氮罐:選擇購置液氮容器時要綜合考慮容積大小,取放使用方便及液氮揮發量(經濟)三種因素。液氮容器的大小可自25L～500L,可以儲存1ml的安瓿250～15000個左右。液氮溫度可低達-196℃,使用時應防止凍傷。由于液氮不斷揮發,應注意觀察存留液氮情況,及時定期補充液氮,避免揮發過多而致細胞受損。

8). 離心機:進行細胞培養時,常規需要進行制備細胞懸液、調整細胞密度、洗滌、收集細胞等工作,通常需要使用離心機。

9). 精密電子天平:常用的有扭力天平、精密天平及各種電子天平。

10). 消毒器:直接或間接與細胞接觸的物品均需消毒滅菌處理。

11). 濾器:目前細胞培養工作中采用的培養用液,包括人工合成培養液、血清、消化用等常含有維生素、蛋白、多肽、生長因子等物質,這些物質在高溫或射線照射下易發生變性或失去功能,因而上述液體多采用濾過消毒以除去細菌。

2. 常用的培養器皿:

1). 培養瓶:由玻璃或塑料制成。主要用于培養、繁殖細胞。進行培養時培養瓶瓶口加蓋螺旋瓶蓋或膠塞,膠塞多用于密封培養。國產培養瓶的規格以容量(ml)表示,如250ml、100ml、25ml等;進口培養瓶則多以底面積(cm2)表示。

2). 培養皿:由玻璃或塑料制成,供盛取、分離、處理組織或做細胞毒性、集落形成、單細胞分離、同位素摻入、細胞繁殖等實驗使用。常用的培養皿規格有10、9、6cm、3.5cm等。

3). 多孔培養板:為塑料制品。可供細胞克隆及細胞毒性等各種檢測實驗使用。其優點是節約樣本及試劑,可同時測試大量樣本,易于進行無菌操作。培養板分為各種規格,常用的規格有:96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。

4). 培養操作有關的器皿:

a). 貯液瓶:主要用于存放或配制各種培養用液體如培養液、血清及試劑等。貯液瓶分為各種不同規格,如1000ml、500ml、250ml、100ml、50ml、5ml等。

b). 吸管:主要分為刻度吸管、無刻度吸管。刻度吸管主要用于吸取、轉移液體,常用的有1ml、2ml、5ml、10ml等規格。無刻度吸管分為直頭吸管及彎頭吸管,除可以作吸取、轉移液體外,彎頭尖吸管還常用于吹打、混勻及傳代細胞。

c). 加樣器(移液器):用于吸取、移動液體或滴加樣本。可根據需要調節量的大小,吸量準確、方便。尤以微量加樣器,可保證實驗樣品(或試劑)含量,重復性良好。目前,可高溫消毒的,多通道的各類移液器可供使用者選擇,能確保加樣準確、快速、方便并且達到無菌要求。

d). 其他用品:尚有收集細胞用的離心管,放置試劑或臨時插置吸管用的試管,裝放吸管以便消毒的玻璃或不銹鋼容器,用于存放小件培養物品便于高壓消毒的鋁制飯盒或貯槽,套于吸管頂部的橡膠吸頭,封閉各種瓶、管的膠塞、蓋子、凍存細胞用的安瓿或凍存管、不同規格的注射器、燒杯和量筒以及漏斗,超凈工作臺使用的酒精燈,供實驗人員操作前清潔消毒手使用的盛有酒精或其他消毒液的微型噴壺等。